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CEInfinite質(zhì)譜直聯(lián)型全柱成像等電聚焦iCIEF

CEInfinite iCIEF-MS Online coulping platform

在蛋白質(zhì)生物制品的開發(fā)和生產(chǎn)中，由于翻譯后修飾(PTMs)和降解，會(huì)產(chǎn)生目標(biāo)蛋白質(zhì)的電荷異構(gòu)體。生物制藥公司依靠毛細(xì)管等電聚焦(CIEF)和成像CIEF (iCIEF)來(lái)量化電荷異構(gòu)體。表征生物電荷異構(gòu)體對(duì)于許多生命周期階段都是有用的，包括細(xì)胞系選擇、穩(wěn)定性研究、配方和過(guò)程控制，但是這種表征需要將蛋白質(zhì)分離成具有足夠純度的單個(gè)電荷異構(gòu)體的餾分以用于下游分析。

此外，iCIEF與用于表征的質(zhì)譜儀(MS)的直接耦合將顯著簡(jiǎn)化表征過(guò)程。

AES開發(fā)了CEInfinite制備型iCIEF系統(tǒng)和專有的全柱成像檢測(cè)(WCID)分離柱，用于iCIEF-WCID的分離和與MS在線耦合，允許實(shí)時(shí)觀察分離聚焦(iCIEF)動(dòng)態(tài)以及隨后分離電荷異構(gòu)體峰的遷移過(guò)程。在壓力遷移過(guò)程中，電場(chǎng)使分離毛細(xì)管中的樣品保持聚焦。分離毛細(xì)管的內(nèi)徑較大，而傳輸毛細(xì)管的內(nèi)徑較小。因此，這種內(nèi)徑的差異極大地減少了分離的蛋白質(zhì)異構(gòu)體在離開小柱時(shí)的擴(kuò)散與再混合。

詳情介紹

CEInfinite iCIEF-MS的亮點(diǎn)

• 直接將iCIEF-MS與Thermo Fisher Scientific、Waters和Bruker的傳統(tǒng)低流量或高靈敏度納流ESI聯(lián)用。

• 任何緩沖液或溶液都可以用作補(bǔ)充液。不涉及化學(xué)遷移。蛋白質(zhì)電荷變異體在根據(jù)pI不同依次被引入MS。
  

• CE-MS可以直接從任何現(xiàn)有的iCIEF或CIEF方法轉(zhuǎn)換而來(lái)。在低和高樣品濃度下都能獲得良好的分離度。

NIST mAb 樣品的iCIEF-MS分析

iCIEF-UV(紅色)和iCIEF-MS(藍(lán)色)可清晰觀察到電荷異構(gòu)體的Profile，并且獲得了所有變異體峰的優(yōu)異MS譜圖，這允許我們對(duì)大多數(shù)完整的NIST mAb電荷變體進(jìn)行解卷積。

結(jié)果表明，堿性峰B1和B2主要是C端賴氨酸的異構(gòu)化造成的，酸性峰A1分子量與主峰差異較小，可能是由于脫酰胺等修飾造成的，需要通過(guò)制備型iCIEF做進(jìn)一步的研究和確認(rèn)。

來(lái)自客戶的評(píng)價(jià)：

“iCIEF在生物制藥開發(fā)過(guò)程中監(jiān)控電荷變化方面發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。CEInfinite允許我們獲得iCIEF檢測(cè)到的產(chǎn)物變體的質(zhì)量讀數(shù)，這對(duì)于理解電荷變異體的化學(xué)性質(zhì)有很大的幫助。當(dāng)將CEInfinite與Orbitrap MS系統(tǒng)提供的高分辨率精確質(zhì)譜結(jié)合使用時(shí)，可以獲得對(duì)產(chǎn)品變異體和產(chǎn)品穩(wěn)定性的詳細(xì)了解。

簡(jiǎn)而言之，使用CEInfinite的iCIEF-MS是生物制藥開發(fā)中非常強(qiáng)大的表征工具。"

-Dan Bach  Kristensen博士

Symphogen首席科學(xué)家