杜克雷嗜血桿菌全細(xì)胞溶解產(chǎn)物的LXQ測(cè)定
本文描述了快速和靈敏的對(duì)全細(xì)胞溶解產(chǎn)物分析方法，首先是快速簡(jiǎn)單的1D-SDS PAGE分離，然后是LXQ線性離子阱的LC/MSn分析。數(shù)據(jù)清楚表明LXQ具有很好的分析速度和靈敏度，非常適合于分析蛋白質(zhì)復(fù)雜樣品。延長(zhǎng)的色譜梯度分離，結(jié)合凝膠分離降低了樣品的復(fù)雜性，增加了SEQUEST可搜索MSn譜圖的數(shù)量，隨后的蛋白質(zhì)識(shí)別可靠性。在這個(gè)實(shí)驗(yàn)中，45分鐘的運(yùn)行時(shí)間內(nèi)識(shí)別出79個(gè)蛋白質(zhì);梯度時(shí)間延長(zhǎng)到150分鐘時(shí)，可識(shí)別222種蛋白質(zhì);將全細(xì)胞溶解產(chǎn)物凝膠帶分隔成5個(gè)明顯的切片時(shí)，利用150分鐘時(shí)間梯度，識(shí)別出360種蛋白質(zhì)。使用2D-凝膠分離經(jīng)常丟失的，與發(fā)病機(jī)理相關(guān)的不同大、小膜蛋白和大分子蛋白質(zhì)也同樣被識(shí)別。通過使用更長(zhǎng)的時(shí)間梯度，兩個(gè)分常大懸浮蛋白質(zhì)(>450 kDa)也被識(shí)別。
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