天天看片永久免费播放_超清无码影视在线资源站_色色五月天激情免费电影_不卡在线观看无码

本應用是ISOLUTE®  PLD+萃取血清中25-羥基維生素D，然后在LC-MS/MS上分析檢測。

對于生化樣品制備來說，ISOLUTE®PLD+除蛋白和磷脂板比傳統(tǒng)的蛋白沉淀技術，ISOLUTE®PLD+大幅改了提取清潔度。本應用介紹了一種簡單、有效的®ISOLUTE PLD+萃取血清中25-羥基維生素D的方法，萃取產物蛋白質和磷脂含量極低，具有高重現(xiàn)性的回收率。

分析目標物
25-羥基維生素D2、25-羥基維生素D3和內標d6-羥基維生素D3

樣品制備步驟
板子：ISOLUTE® PLD+除蛋白和磷脂板，貨號：918-0050-P01

樣品預處理
血清樣品加入10uL內標（相當于30ng/m），混合，靜止1小時左右發(fā)生結合反應

使用的溶劑
ISOLUTE® PLD+ 板的每個孔加入400uL乙腈（MeCN）

使用的樣品
取100uL帶有內標的血清，混合，重復抽吸/分配步驟。

洗脫目標物
正壓3psi或-2bar真空下約5分鐘，如果樣品含有高顆粒物可以適當增加壓力或真空條件。

萃取后處理
使用Biotage® SPE Dry (40 °C ，40 L/min)或TurboVap® (40°C ，1.0 bar). 空氣或氮氣氣流吹干萃取液。

定容
用100uL30/70甲酸銨（2mM）100µl，0.1%甲酸水/甲醇定容。

UPLC的條件
儀器
Waters Acquity UPLC

色譜柱
ACE EXCEL 2 C18-PFP, 100 mm x 2.1 mm id 2 μm, (ACT, UK)

質譜的條件
Quattro Premier XE三重四極桿，ESI電噴霧離子源

結果
色譜圖
三分鐘完成25-羥基維生素D2和D3分析，如下圖。

回收率
使用血清和處理過的血清，在不同濃度2-00ng/mL下測試，維生素D的高重現(xiàn)的回收率>70%。如下圖。

PBS/BSA校正曲線
使用PBS/BSA，在不同濃度1-100ng/mL的校正曲線測定25-羥基維生素D2和D3，具有非常好的相關系數(shù)，r² > 0.99。

Chromsystems 校正曲線
使用已經校正的血清標準（采購自Chromsystems），在0-69ng/mL的濃度下，測定25-羥基維生素D2和D3，具有非常好的相關系數(shù)，r² > 0.99。

DEQAS外部質量評估方案
用優(yōu)化的方法得到DEQAS 25-羥基維生素D結果
本方法后經5個DEQAS血清樣品萃取測試，一起與Chromsystems校正因子進行優(yōu)化。DEQAS標準至少80%的結果落在所有實驗室修剪平均的+或-25%以內。

訂貨信息
貨號：918-0050-P01 ，ISOLUTE® PLD+ 固定孔板 數(shù)量：1個

貨號：121-9600 Biotage® VacMaterTM-96 樣品處理歧管 數(shù)量：1個

貨號：PPM-96，Biotage® PRESSURE+ 96 正壓歧管，數(shù)量：1個

貨號：SD-9600-DHS-EU，Biotage® SPE Dry樣品濃縮系統(tǒng)220/240V 數(shù)量：1個

貨號：C103264，TurboVap® 96樣品蒸發(fā)儀220/240V 數(shù)量：1個

附Biotage® Extrahera^TM方法設置，更多配置方法見原文

維生素D（vitamin D ）

為固醇類衍生物，具抗佝僂病作用，又稱抗佝僂病維生素。目前認為維生素D也是一種類固醇激素，維生素D家族成員中重要的成員是VD2（麥角鈣化醇）和VD3（膽鈣化醇)。維生素D均為不同的維生素D原經紫外照射后的衍生物。植物不含維生素D，但維生素D原在動、植物體內都存在。維生素D是一種脂溶性維生素，有五種化合物，對健康關系較密切的是維生素D2和維生素D3。它們有以下三點特性：它存在于部分天然食物中；人體皮下儲存有從膽固醇生成的7-脫氫膽固醇，受紫外線的照射后，可轉變?yōu)榫S生素D3。適當?shù)娜展庠∽阋詽M足人體對維生素D的需要。

從食物中得來的維生素d，與脂肪一起吸收，吸收部位主要在空腸與回腸。膽汁幫助其吸收。脂肪吸收受干擾時，如慢性胰腺炎、脂肪痢及膽道阻塞都會影響他的吸收。吸收的維生素d與乳糜微粒相結合，由淋巴系統(tǒng)運輸，但也可與維生素d運輸?shù)鞍祝?alpha;-球蛋白部分）相結合在血漿中運輸。有些與β-脂蛋白相結合，口服維生素d與乳糜微粒結合，比從皮膚中來的與蛋白結合者易于分解。當維生素d運到肝臟中，在微粒體中經單氧酶系統(tǒng)作用，將其25位羥基化形成25（oh）d(25-hydroxy vitamin d3)，肝外的其他組織也可吸取維生素d及25-（oh）d3，因此組織中維生素d及25（oh）d3及其總量比血漿中多，如果靶組織需要，可將其釋放出來，他們在脂肪組織中多，釋放速度慢，當體重減輕，脂肪減少時，他們也可釋放出來。靜脈注射維生素d，較快的由血漿進入到組織中。血漿中25（oh）d3在注射后1～3天達到高峰，其濃度可達到20～40ng·ml-1,高可達80 ng·ml-1。濃度與攝入量有一定的關系，小于4 ng·ml-1,臨床上可發(fā)生佝僂病及骨質軟化。25（oh）d3在腎線粒體單氧酶作用下（酶系統(tǒng)包括細胞色素p450、鐵硫蛋白及黃素蛋白），經羧基化，轉變?yōu)?，25-（OH）2-VD3(1,25-dihydroxy vitamin d),他是維生素d的生物作用形式，現(xiàn)將其作為激素。

臨床意義
1．維生素D又稱抗佝僂病維生素，是類固醇衍生物，屬脂溶性維生素。維生素D主要包括維生素D2（又稱麥角鈣化醇）及維生素D3。其生物學作用主要包括①促進小腸鈣吸收；②促進腎小管對鈣、磷的重吸收；③調節(jié)血鈣平衡；④對骨細胞呈現(xiàn)多種作用；⑤調節(jié)基團轉錄作用。
2．維生素D缺乏主要表現(xiàn)為骨質軟化癥（osteomalacia）、骨質疏松癥（osteoporosis）及佝僂病等。前者常見于成人和孕產婦，后者多發(fā)生于兒童。①骨質軟化癥：成人（特別是孕婦、乳母）維生素D缺乏引起的骨質軟化癥，其臨床表現(xiàn)為骨質軟化，腰腿部骨疼痛、易變形等；②骨質疏松癥：維生素D缺乏所致的骨質疏松癥常見于老人，由于其腎功能降低，胃腸吸收欠佳，戶外活動減少，影響骨鈣化可發(fā)生自發(fā)性骨折。此外，維生素D缺乏也可引起肌肉痙攣、小腿抽搐等手足痙攣癥的癥狀；③佝僂?。河捎诰S生素D的缺乏，骨骼不能正常鈣化，使骨骼變軟，彎曲變形，患兒表現(xiàn)為煩躁、夜驚、多汗等，嚴重缺鈣患兒可見肋骨與軟肋骨銜接處有珠狀突起，下肢呈“O”形或“X”形，胸骨外凸形成雞胸等，由于鈣磷代謝失調，患兒牙齒發(fā)育不良，易發(fā)生齲齒。
3．維生素D過多常由于過量攝入維生素D引起。其臨床表現(xiàn)為疲勞、無力、食欲缺乏、惡心、嘔吐、腹瀉等，嚴重者可有生長發(fā)育遲緩、高熱、脫水、癲癇發(fā)作等，可引起腎、腦、肺、胰腺等臟器有異位鈣化灶和腎結石。

關于綠綿科技
北京綠綿科技有限公司(簡稱：綠綿科技)以體現(xiàn)客戶服務高價值為宗旨，以專業(yè)精神和技能為廣大實驗室分析工作者提供樣品前處理、樣品制備及分析、實驗數(shù)據(jù)分析和管理的全面解決方案，致力于協(xié)助客戶提高分析檢測的效率和水平。主要代理產品：LabOS實驗室運營系統(tǒng)、Lumtech半制備/制備液相色譜、MassWorks準確質量測定及分子式識別、New Objective納噴離子源、GE生命科學設備、凝膠凈化前處理、在線固相萃取、濃縮儀、氮吹儀、電噴霧離子遷移譜、全柱成像毛細管等電聚焦電泳儀、實驗室氮氣氫氣空氣發(fā)生器、Agilent中端氣相液相、生物耗材、Buffer緩沖液、固相萃取耗材。
電話：010-82676061/2/3/4/5/6/7傳真：010-82676068 E-mail：info@lumtech.com.cn。