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本應(yīng)用描述了ISOLUTE®  NH₂固相萃取柱萃取人尿中乙基葡萄糖醛酸苷（EtG）和硫酸二乙酯（EtS）。

（乙基葡萄糖醛酸苷（EtG）和硫酸二乙酯（EtS））

Ferrara等近發(fā)表出版物，使用ISOLUTE NH₂固相萃取柱，處理制備人體尿液中酒精的生物標(biāo)志物的方法。本方法每年可以成功處理6000個樣品。

據(jù)報道，尿液濃度為500ng/ml，方法重復(fù)性RSD%<20%。低檢測定量限為100ng/mL，這種方法主要的優(yōu)點是不需要蒸發(fā)步驟而直接進(jìn)行液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜分析。

樣品處理流程
板子：ISOLUTE NH2 100mg/2mL柱，貨號p/n:470-0010-A
樣品預(yù)處理：100uL尿中加入HCl（6M，50uL）和1mL乙腈，離心
活化：2mL甲醇活化每個柱子
平衡：2mL水平衡各個柱子，然后含有0.2%（v/v）乙酸的乙腈2mL平衡
上樣：1mL/min的速度上樣總體積2.15mL
干擾物洗脫：用1mL己烷洗干擾物，正壓下干燥柱子10分鐘。
洗脫分析物：10mM的甲酸鹽/甲酸銨d (pH 3, 2 x 750 µL)洗脫分析物。需要不干模式。

（液相參數(shù)，Agilent 1200 HPLC）

(質(zhì)譜參數(shù)，API4000串接液質(zhì)譜)

（分離譜圖）

 （留存的樣品A-F）

本研究優(yōu)化參數(shù)并提出了建議，初方法的開發(fā)在Biotage 美國應(yīng)用實驗室，然后辦法轉(zhuǎn)移ARUP奧雅納，進(jìn)一步研究方法的性能，與真正的病人以前的樣本進(jìn)行驗證的裁判方法。正交測量的結(jié)果表明，可以提供相同的診斷數(shù)值。

黃慧等發(fā)表的《酒精濫用的生物學(xué)標(biāo)志物》就綜述了酒精生物學(xué)標(biāo)志物。酒精生物學(xué)標(biāo)志物有兩類：間接生物學(xué)標(biāo)志物和直接生物學(xué)標(biāo)志物。 間接生物學(xué)標(biāo)志物反映酒精對人體器官、組織或機體生化反應(yīng)的毒性作用，直接生物學(xué)標(biāo)志物為酒精代謝的產(chǎn)物，尤其是那些存在時間較長、非氧化性的代謝物。作為酒精生物學(xué)標(biāo)志物需要具備一定的準(zhǔn)確性，即足夠的靈敏度和特異性。
常見的間接生物學(xué)標(biāo)志物包括r-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT)、紅細(xì)胞平均體積(MCV)。常用的直接生物學(xué)標(biāo)志物包括葡萄糖醛酸苷（EtG）、硫酸乙酯（EtS）、磷脂酰乙醇（PEth）、脂肪酸乙酯（FAEEs）。由于酒精生物學(xué)標(biāo)志物的無創(chuàng)性和便捷性，用途甚廣，在常規(guī)臨床工作、急診室、戒酒康復(fù)機構(gòu)、酒后駕駛、肝移植酒精攝入的評估、胎兒酒精綜合征等方面均有應(yīng)用；為酒精相關(guān)問題的預(yù)防、診斷、跨學(xué)科合作打開了新視角。

酒后駕車是一個性的交通安全問題。我國每年因交通事故死亡中約25%-30%與酒后駕車有關(guān)。由于乙醇在體內(nèi)代謝較快，一般飲酒后6-8h體內(nèi)已檢測不到乙醇。對于疑酒后駕車肇事后逃逸者，在一定時間后體內(nèi)檢測不到乙醇，因此需要尋找新的途徑證明肇事者是否為酒后駕車。
乙醇進(jìn)入人體后，有一部分乙醇與尿嘧啶核苷-5‵-二磷-葡萄糖醛酸結(jié)合成乙基葡萄糖醛酸苷（ethyl glucuronide，EtG）由于其比原體乙醇的半衰期長，當(dāng)血液中乙醇濃度低于檢測限時，體內(nèi)仍可在一定時間內(nèi)檢出EtG。因此血液中EtG的檢測及評價越來越為人們所重視 ，特別是酒后駕車肇事逃逸案件中，抽血與事故發(fā)生時間隔過長，血液中往往測不出乙醇成分，但可以檢測血液中EtG。

訂貨信息：

貨號：470-0010-A ISOLUTE NH2 100mg/1 mL 數(shù)量：100個
貨號：PPM-48 Biotage正壓歧管，48孔 ，數(shù)量：1個
貨號：C103198 TurboVap LV 100/120V，無架子 ，數(shù)量：1個
貨號：C103199 TurboVap LV 220/240V ，無架子 ，數(shù)量：1個

（PPM-48 Biotage正壓歧管，48孔）

高級附件：

大流量氮氣發(fā)生器Maestro或EURUS（法德賽），用于液質(zhì)聯(lián)用儀持續(xù)供氣，大于99%的純度，分子篩長壽面技術(shù)降低儀器維護費用。

文獻(xiàn)：Donata Favretto & Alessandro Nalesso & Giampietro Frison & Guido Viel & Pietro Traldi & Santo Davide Ferrara, Int. J. Legal Med. (2010) 124:161–164

來源于：Application Note AN818.V.1 ©2014 Biotage ： A No-Drydown SPE Method for Biomarkers of Alcohol Consumption in Human Urine

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